用紫外分光光度計測量吸光度時讀數(shù)會不斷變化

　　為什么當(dāng)我們使用紫外分光光度計測量吸光度時讀數(shù)會不斷變化？是因為顯色反應(yīng)還沒有完成還是其他原因？其實不然，儀器的靈敏度越高，吸光度值的漂移就越大。紫外分光光度計的設(shè)計原理和工作原理允許吸光度值在一定范圍內(nèi)變化，儀器具有一定的準(zhǔn)確度和精密度。

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　　1、樣品的稀釋濃度

　　樣品稀釋濃度也是一個不可忽視的因素，因為樣品中不可避免地存在一些細(xì)小顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在會干擾測試結(jié)果。為了盡量減少顆粒對檢測結(jié)果的影響，要求核酸的吸光度值至少大于0.1A，最好在0.1-1.5A范圍內(nèi)。在這個范圍內(nèi)，粒子的干擾比較小，結(jié)果比較穩(wěn)定。因此，這意味著樣品的濃度不能太低或太高（超出光度計的測試范圍）。

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　　2、核酸本身的理化性質(zhì)

　　溶解核酸的緩沖液的pH值和離子濃度也會在測試過程中離子濃度過高導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用具有一定pH值和低離子濃度的緩沖液（如TE）可以大大穩(wěn)定讀數(shù)。核酸的吸光度值受pH值和緩沖離子濃度的影響。只有在一定的pH和低離子濃度（如10mMTris-HClpH8.0）下才能得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。水的pH值不穩(wěn)定，可能導(dǎo)致檢測錯誤。一些緩沖液在紫外范圍內(nèi)有自己的吸收。為確保準(zhǔn)確測量，請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。

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　　3、紫外分光光度計操作因素

　　1)使用儀器前，用戶應(yīng)先了解儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各操作旋鈕的作用。

　　2)儀器應(yīng)放置在干燥的室內(nèi)，使用時放置在堅固穩(wěn)定的工作臺上，室內(nèi)照明不宜過強。天氣炎熱時，請勿使用風(fēng)扇直接對儀器吹氣，以免燈泡燈絲點亮不穩(wěn)定。

　　3)按下電源前應(yīng)檢查儀器的安全性能，電源接線要牢固，電源也要好，各調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置要正確，然后按下電源開關(guān).儀表未接通電源時，儀表指針必須在“0”線上，此時可用儀表上的校準(zhǔn)螺絲調(diào)整。

　　4)如果大幅度改變測試波長，需要稍等片刻，等燈管熱平衡后，重新校準(zhǔn)“0”和“100”點，再重新測量。

　　5)比色杯使用后，立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈的軟紗布擦去水漬，以免損壞表面光潔度，影響比色杯的透光率。

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