如何選擇紫外分光光度計(jì)的參比溶液

　　紫外分光光度計(jì)是一種將成分復(fù)雜的光，分解成光譜線的科學(xué)儀器，利用能產(chǎn)生多種波長的光源，通過一系列的分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光，光通過被測(cè)樣品時(shí)，部分光被吸收，并計(jì)算出樣品的吸光度值，轉(zhuǎn)化為樣品的濃度。它已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器。它常用于核酸、蛋白質(zhì)和細(xì)菌生長濃度的定量。

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　　由于參比溶液吸收一定量的光，通常需要在比色法測(cè)量前扣除這種吸收，以便更接近被測(cè)組分的吸收值，這樣就可以從校準(zhǔn)曲線上計(jì)算出被測(cè)組分的濃度。紫外分光光度計(jì)在進(jìn)行光度測(cè)量時(shí)，利用參比溶液來調(diào)整儀器的零點(diǎn)，可以消除由于吸收池壁和溶劑對(duì)入射光的反射和吸收而產(chǎn)生的誤差，并扣除干擾的影響。參考溶液的選擇可以根據(jù)以下條件進(jìn)行。

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　　紫外分光光度計(jì)參比溶液的選擇

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　　1、溶劑

　　試樣成分簡(jiǎn)單，共存的成分對(duì)測(cè)定的光的波長沒有吸收。

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　　2、試劑

　　色素或其他試劑對(duì)測(cè)定波長的吸收，按相同條件進(jìn)行顯色反應(yīng)，不需要加入試樣的試劑。

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　　3、試液

　　樣品基質(zhì)溶液在測(cè)定波長處有吸收，顯色劑本身無色，可按與顯色反應(yīng)相同的條件處理樣品，只是不加顯色劑。

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　　4、平行操作參考

　　用不含被測(cè)組分的試樣，在與被測(cè)樣品相同的條件下同時(shí)進(jìn)行，得到平行操作參比溶液。

　　例如，在監(jiān)測(cè)某種藥物濃度時(shí)，將正常人的血樣和待測(cè)血液濃度的血樣平行處理，前者得到的溶液可作為平行操作參比溶液。

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　　注意事項(xiàng)

　　1、試劑和顯色劑無色時(shí)，可采用蒸餾水作為參比溶液。

　　2、顯色劑有顏色時(shí)，可以選擇不加樣品的試劑空白溶液作為參比溶液。

　　3、顯色劑是無色的，而試液中存在其他有色離子時(shí)，可用不含顯色劑的試液作為參比溶液。

　　4、顯色劑與供試品溶液都有顏色時(shí)，可在供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)难诒蝿?#xff0c;將被測(cè)組分掩蔽起來，使之不再帶有顯色劑，而顯色劑和其他試劑則按供試品溶液的測(cè)定方法加入，作為參考溶液，這樣可消除顯色劑與某些共存組分的干擾。

　　5、改變?cè)噭┑募尤腠樞?#xff0c;使被測(cè)組分不發(fā)生顏色反應(yīng)，此溶液可作為消除干擾的參考溶液。

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